3M测试片谈谈霉菌和酵母菌的测试片计数。

一、原理 　　

3M检测片酵母菌和霉菌(PctrifilmTMYeastandMold,PYM)测试片是一种预先制备好培养基的霉菌和酵母菌计数的卡片。培养基中有作为载体的冷水可溶性凝胶和对酵母菌和霉菌的5-溴-4-氯-3吲哚基-磷酸盐指示剂，以及抑制生长的四环素、氯霉素。圆形生长区域划分为30个1cmx1cm的方格用来计数。 　　

二、设备和材料 　

恒温培养箱(25℃~28℃),冰箱(0℃~4℃),均质器(旋刀式或拍击式),移液器，PctrifilmTM测试片压板，振荡器，天平(感量0.1g),培养基和试剂，PctrifilmTM酵母菌和霉菌测试片，稀释液，Butterfield's磷酸盐缓冲液，0.1%蛋白胨水。

三、步骤　

1.固体 　　

以无菌将25g样品加入到225mL的稀释液(磷酸盐缓冲液或0.1%蛋白胨水)中，8000r/min均质2min(或放入无菌均质袋中，用均质器拍打2min),制成1:10样品匀液。 　　

2.液体 　

取25mL样品原液，放入装有225mL,稀释液的无菌玻璃瓶中，以30cm幅度，7s内振摇25次，制成1:10样品匀液。 　　

将上述匀液做10倍系列梯度稀释，根据样品的污染程度，选择适宜的2个-3个连续稀释度，每个稀释度接种2张测试片。 　　

将3M检测片PYM检验测试片放在平坦的实验台上，揭开上层膜，用移液器将1ml样液加到3M检测片的中间，轻轻覆盖上层膜，用压板平稳压下，使其均匀覆盖在测试片的圆形培养面积上，拿起压板，静置多于1min,使培养基凝固。 　　

将测试片的透明面朝上放置于培养箱内，堆叠不能超过20片，在25℃-28℃下培养3d-5d。 　　

3.判读 　　

培养3d后观察计数，如果5d后，测试片上的菌生长过快，出现边缘模糊的菌落，就用3d的计数结果作为估计菌落数。 　　

在PYM测试片上，颜色均匀一致，灰白色到蓝绿色或粉红色，没有暗色中间，边界的小型隆起菌落计为酵母菌。颜色多样(棕色、米色、橙色、蓝绿色等)、中间颜色深暗的大型或小型扁平扩散菌落计为霉菌。估计菌落数。

在PYM测试片上，颜色均匀一致，灰白色到蓝绿色或粉红色，没有暗色中心，边界明显的小型隆起菌落计为酵母菌。颜色多样(棕色、米色、橙色、蓝绿色等)、中心颜色深暗的大型或小型扁平扩散菌落计为霉菌。