保存ATCC菌株的基本方法你还不知道吗？

ATCC菌株是从事微生物学和生命科学研究的基本材料。在医学领域，诊断产品的制备、幼苗的生产和微生物致病性的研究。含有1滴细胞悬浮液的小管放入含有氢氧化钾或五氧化二磷吸水剂的大试管中，用真空泵泵至1.3帕时，将大试管密封保存。这是一种干燥的保存方法，可以降低细胞死亡率，缓慢脱水，适用于各种细菌和真菌。

细胞悬浮液每0.1~0.2毫升注入一个无菌安瓿瓶，在-40℃预冻1小时，然后在-20~30℃真空度为13.3帕的情况下脱水。脱水后期，安瓿瓶外温度可逐渐升至25℃。脱水后样品含水量应低于3%。之后，将安瓿瓶保持1.3帕的真空度，用火焰溶解，保存10℃。为了防止ATCC菌株细胞在冻结和脱水过程中损伤或死亡，应使用保护剂制备细胞悬浮液。保护剂包括脱脂牛奶、血清、10%蔗糖或葡萄糖溶液等。其功能是通过氧离子键对水和细胞的亲和力来稳定细胞成分的形成。该方法适用于病毒、衣原体、枝原体、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等的长期保存。，是目前保存细菌的重要方法。然而，盐杆菌、发光杆菌、粘杆菌、阿舒囊霉、多囊霉和担子菌中的大多数属种不适合这种保存。

用甘油或二甲亚(DMSO)作为保护剂制备细胞悬浮液，放入无菌安瓿中，每管0.2毫升，在控制温度下降率为1℃/分钟的情况下，预冻至-40℃，然后将ATCC菌株立即放入液氮生物储罐中气相(-150℃)保存。恢复培养时，直接入38℃水浴解冻5~10分钟，然后种植在适当的培养基中。这是根据所有生化反应在-130℃以下停止，微生物不能进行代谢活动而设计的冻结方法。为避免冻死、冻伤和细胞内形成大量冰晶，用保护剂制备悬浮液，控制预冻时的冷却速率和解冻时的融化速率。大多数微生物属种适合慢速冻结和快速解冻。该方法适用于病毒、枝原体、各种细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌、蓝藻等。