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菌株保存保藏方法

      对于每个阳性样品,保存检出的食源性致病菌分离株,以便用于进一步的研究;分离菌株的编号应具有唯一性,标识清楚;标签应防水、字迹耐冻;各省级实验室应建立食源性致病菌菌种库,妥善保存食源性致病菌分离株。
 
推荐常见的食源性致病菌菌株保藏方法有以下2种:
 
1.甘油冷冻保藏法
 
(1)保藏时间
 
本方法适合于菌种的长期保藏,保藏时间可达10年以上。
 
(2)方法
 
在充分加热混匀的BHI(副溶血性弧菌、创伤弧菌保存时BHI中NaCl应加至3%)中加入甘油,使甘油达总体积的40%~50%,充分混合,分装至菌种保存管(2mL左右),121℃高压20min,备用;使用无菌棉签从非选择性平板上取新鲜纯培养菌落,加入装有BHI和甘油的无菌冻存管中,混匀后,-80℃保存(如果无-80℃冰箱,可选择-40℃保存,但保存效果较差)。
 
(3)注意事项
 
每株菌至少保存2管,分别放置在2个不同冻存盒中,一盒日常使用,另外一盒长期保存;使用时,取出相应的冻存盒,快速接种,以避免反复冻融;使用时,无菌操作,避免污染。
2.半固体保藏法
 
(4)保藏时间
 
本方法适合于短期菌种保藏,保藏时间一般为3~6个月。
 
(5)方法
 
无菌操作,挑取待保藏的菌种,穿刺接种约含5mL无菌半固体营养琼脂或半固体脑心浸液琼脂(副溶血性弧菌、创伤弧菌保存时BHI中NaCl应加3%)的小试管(约15mm×100mm)中。无菌操作吸取灭菌液体石蜡,加入已培养好的菌种上面,液体石蜡用量以高出半固体1cm 为准,使菌种与空气隔绝。将试管直立,置4℃或室温(副溶血性弧菌、创伤弧菌)下保存。
 
(6) 注意事项
 
副溶血性弧菌和创伤弧菌应放置室温保存。

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