是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术.
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等.实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片.
其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中首选的组织标本制作方法.
免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体.单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备.多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物.
均一性.一种单抗中,每个抗体的化学结构和氨基酸顺序都相同,只有一种Ig亚类.即单抗是一种纯度很高的均一抗体.而从不同动物,不同时期所得到的多抗,各有不同的化学组成.多抗是多种种类和亚类Ig的混合物.稳定性.单抗的稳定性较差,对PH变化敏感,对热不稳定,提纯过程中易变性,而多抗的稳定性则较好.
特异性.单抗是单一地针对抗原的某一决定簇,所以用它进行血清学反应时,特异性强,敏感性高,一般不发生交叉反应,而多抗能与抗原上的多种抗原决定簇结合,所以特异性较差,较易引起交叉反应.重复性.单抗的重复性好,而多抗每批都不一样.
